DICE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421932

Descripción general

Ints6 codifica DICE1, un componente conservado del complejo Integrator que se asocia con la ARN polimerasa II para coordinar el procesamiento del extremo 3′ de los ARN nucleares pequeños (snRNA) y un control transcripcional más amplio. A través de sus funciones en la maduración del ARN y la regulación de la transcripción, DICE1 influye en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y programas de expresión génica a escala genómica. La actividad alterada de INTS6/DICE1 se ha relacionado con un control del crecimiento desregulado y con contextos de señalización oncogénica, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos de supresión tumoral y estrés transcripcional. En sistemas murinos, la perturbación de Ints6 es útil para diseccionar vías dependientes de Integrator que acoplan el procesamiento de ARN con la cromatina y las salidas de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DICE1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ints6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ints6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ints6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DICE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ints6 para la investigación de la señalización de DICE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ints6 críticos para la función de DICE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ints6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DICE1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DICE1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ints6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DICE1 (m) y el plásmido HDR DICE1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ints6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ints6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.