Plasmide Double Nickase (h) DHS: sc-402858-NIC

Le gène humain **DHPS** code la **désoxyhypusine synthase (DHS)**, une enzyme essentielle dépendante du NAD qui catalyse la première étape de l’hypusination en transférant un groupement aminobutyle de la spermidine vers **eIF5A**, générant la désoxyhypusine. Cette modification post-traductionnelle est nécessaire à l’activité d’eIF5A et soutient l’élongation de la traduction, le contrôle de la synthèse protéique et la progression du cycle cellulaire, reliant le métabolisme des polyamines à la protéostase. La fonction de DHS recoupe des voies qui régulent la croissance cellulaire et les réponses au stress, et des perturbations de l’axe d’hypusination **DHPS–eIF5A** ont été associées à une prolifération dérégulée et à des phénotypes neurodéveloppementaux. Comme l’hypusination influence la traduction sélective de motifs difficiles à synthétiser, DHPS est fréquemment étudié dans le contexte du remodelage métabolique, du stress protéotoxique et des mécanismes qui maintiennent l’homéostasie tissulaire.

DHS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHPS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHPS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHPS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHPS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.