DGUOK Double Nickase Plasmid (h): sc-407916-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DGUOK Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DGUOK Double-Nickase-Plasmid (h) und DGUOK Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DGUOK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DGUOK: sc-376267
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DGUOK Double Nickase Plasmid (h) | sc-407916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DGUOK Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Desoxyguanosin-Kinase (DGUOK) ist ein Enzym der mitochondrialen Matrix, das Desoxyguanosin und Desoxyadenosin phosphoryliert und dadurch Desoxyribonukleotid-Vorstufen bereitstellt, die für die Replikation und Reparatur der mitochondrialen DNA (mtDNA) benötigt werden. Indem DGUOK ausgeglichene dNTP-Pools in den Mitochondrien unterstützt, trägt es zur Aufrechterhaltung der mtDNA-Kopienzahl und -Integrität bei und verknüpft den Nukleotid-Salvage-Stoffwechsel mit der Kapazität der oxidativen Phosphorylierung und der mitochondrialen Biogenese. Eine Störung der DGUOK-Aktivität ist mit mtDNA-Depletion und einer beeinträchtigten Funktion der Atmungskette assoziiert, was DGUOK für Studien zur mitochondrialen Erhaltung, zum Energiestoffwechsel und zu zellulären Stressantworten relevant macht. Humanes DGUOK wird daher häufig in Modellen mitochondrialer Dysfunktion und der Nukleotidhomöostase untersucht.
DGUOK Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DGUOK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DGUOK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DGUOK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DGUOK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.