Plásmido CRISPR de Activación (h) Dermatopontin: sc-402924-ACT

El gen humano DPT codifica dermatopontina, una proteína de la matriz extracelular (MEC) que se une a los colágenos y decora redes fibrilares para influir en la organización de la matriz, la adhesión célula–matriz y las propiedades biomecánicas de los tejidos conectivos. La dermatopontina contribuye al comportamiento de los fibroblastos y a la remodelación de la MEC al modular las interacciones entre fibrillas de colágeno, proteoglucanos y receptores de la superficie celular, apoyando procesos como la reparación de heridas y la arquitectura del estroma. La expresión alterada de DPT y la composición de la MEC se examinan con frecuencia en contextos de fibrosis, estroma asociado a tumores y remodelación vascular o dérmica, donde los cambios en la organización del colágeno y la adhesión celular afectan la función tisular. Como regulador asociado a la matriz, DPT también es relevante en estudios de remodelación impulsada por TGF-β y de programas transcripcionales más amplios vinculados a la mecanotransducción.

Dermatopontin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DPT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dermatopontin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DPT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DPT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dermatopontin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DPT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dermatopontin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dermatopontin en células tumorales con expresión de DPT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.