Plasmide CRISPR/Cas9 KO DEF6 (h): sc-405524

Présentation

DEF6 (homologue de « differentially expressed in FDCP 6 ») code un facteur d’échange de nucléotides de guanine associé à l’immunité, qui coordonne la signalisation en aval des récepteurs antigéniques en intégrant les événements proximaux à la membrane au remodelage de l’actine et aux réponses transcriptionnelles. Dans les lymphocytes, DEF6 module les voies des petites GTPases et contribue à la signalisation dépendante du Ca²⁺, influençant l’expression génique pilotée par NFAT ainsi que les programmes de cytokines qui façonnent l’activation et la différenciation. Par ces fonctions, DEF6 participe à l’organisation de la synapse immunologique et, plus largement, à la régulation de l’homéostasie de l’immunité adaptative. Une activité ou une expression dérégulée de DEF6 a été associée à une signalisation immunitaire aberrante et à une susceptibilité accrue aux pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DEF6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DEF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DEF6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DEF6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DEF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DEF6 pour l'étude de la signalisation de DEF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DEF6 essentiels à la fonction de DEF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DEF6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DEF6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DEF6 plasmide HDR (h) et le DEF6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DEF6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DEF6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.