Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DEC-205 Double Nickase Plasmid (h): sc-417220-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DEC-205 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DEC-205 Double-Nickase-Plasmid (h) und DEC-205 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LY75 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DEC-205: sc-515016
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DEC-205 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEC-205 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LY75 kodiert DEC-205 (CD205), einen endozytotischen Rezeptor der C‑Typ-Lektin-Familie, der in bestimmten Subpopulationen dendritischer Zellen stark exprimiert wird. Er bindet glykosylierte Antigene, nimmt sie auf und leitet sie zur Prozessierung in endosomale und lysosomale Kompartimente weiter. Über clathrinvermittelte Aufnahme und vesikulären Transport unterstützt DEC‑205 die MHC‑Klasse‑II‑Präsentation und kann auch Kreuzpräsentationswege beeinflussen, die die adaptive Immunpriming‑Antwort prägen. Die Aktivierung von DEC‑205 überschneidet sich mit Programmen der Mustererkennung und zytokinvermittelten Signalwegen, die die Reifung dendritischer Zellen, Toleranz und die Polarisation von T‑Zellen regulieren. Eine fehlregulierte Antigenverarbeitung und dendritische Zellfunktion unter Beteiligung von LY75 ist relevant für Studien zu Autoimmunität, chronischer Entzündung, Infektionsbiologie und dem Tumor‑Immunmikromilieu.
DEC-205 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LY75-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LY75 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LY75-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LY75-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.