DDX41 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402088-ACT

DDX41 kodiert eine DEAD-Box-Helikase, die als Nukleinsäuresensor und regulatorischer Faktor in der angeborenen Immun-Signalübertragung fungiert. Sie ist an der Erkennung zytosolischer DNA beteiligt und moduliert nachgeschaltete STING/TBK1-abhängige Interferonantworten, wodurch die Nukleinsäureerkennung mit Transkriptionsprogrammen verknüpft wird, die Entzündungsprozesse prägen. DDX41 trägt außerdem zur RNA-Prozessierung und zur Dynamik von Ribonukleoprotein-Komplexen bei und unterstützt damit eine umfassende Kontrolle der Genexpression und der zellulären Homöostase. Genetische Veränderungen oder eine Fehlregulation von DDX41 wurden mit der Biologie hämatologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was das Gen für mechanistische Studien zur Immun-Signalübertragung, zum RNA-Stoffwechsel und zu tumorassoziierten Signalwegen relevant macht.

DDX41 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DDX41-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DDX41 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DDX41-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DDX41-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DDX41-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DDX41-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DDX41-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DDX41-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DDX41-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.