DDX18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406057

Übersicht

DDX18 kodiert eine nukleoläre DEAD-Box-RNA-Helikase, die ATP-abhängiges RNA-Remodeling mit der Ribosomenbiogenese und der RNA-Prozessierung koppelt. DDX18 ist an der Reifung der prä-rRNA, dem Zusammenbau prä-ribosomaler Partikel sowie an der Koordination nukleolärer Stressantworten beteiligt, die den Zellzyklusverlauf und die globale Kapazität der Proteinsynthese beeinflussen. Eine Störung der DDX18-Funktion kann die rRNA-Prozessierung und die Homöostase der Translation beeinträchtigen und verknüpft diesen Faktor damit mit Programmen zur Kontrolle der Zellproliferation und zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität. Eine veränderte Expression oder Abhängigkeit von DDX18 wurde in krebsbezogenen transkriptionellen und funktionellen Studien beobachtet, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt im wachstumsassoziierten RNA-Stoffwechsel stützt.

Das DDX18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DDX18-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DDX18-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DDX18 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDX18-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DDX18-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDX18-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DDX18-Exone abzielen, die für die DDX18-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DDX18-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DDX18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DDX18 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DDX18-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDX18 HDR-Plasmid (h) und DDX18 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DDX18-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DDX18-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.