DDR2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400414-ACT

ディスコイジン・ドメイン受容体2（DDR2）は、コラーゲンによって活性化される受容体型チロシンキナーゼであり、細胞—マトリックス間のシグナル伝達を仲介して、接着、遊走、増殖、および細胞外マトリックスのリモデリングを制御する。線維性コラーゲンに結合すると、DDR2はMAPK/ERK、PI3K/AKT、SRCファミリーキナーゼなどの経路を介したリン酸化依存的シグナルを誘導し、細胞骨格ダイナミクスや、組織リモデリングに関連する転写プログラムに影響を与える。DDR2の活性は、コラーゲンの感知とマトリックスのターンオーバーにおける役割を通じて、間質—腫瘍相互作用や線維化過程に関与しており、DDR2シグナルの変化は、浸潤性挙動や間葉系表現型の変化と関連づけられている。これらの性質により、DDR2は、コラーゲン駆動型シグナル伝達、EMT様の遷移、および微小環境による細胞運命制御を研究するうえで有用な標的となる。

DDR2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDR2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDR2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDR2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDR2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。