Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDIT3/GADD153/CHOP (m): sc-419970

Présentation

Le gène murin Ddit3 code DDIT3 (également appelé GADD153/CHOP), un facteur de transcription bZIP inductible par le stress qui forme des hétérodimères avec des membres de la famille C/EBP afin de reprogrammer l’expression génique lors du stress cellulaire. Il constitue un effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), en aval de la signalisation PERK–eIF2α–ATF4, et intègre le stress du réticulum endoplasmique avec le stress oxydant, la privation de nutriments et les voies de dommages à l’ADN. DDIT3 régule l’apoptose, l’autophagie et le contrôle du cycle cellulaire, en influençant l’intégrité mitochondriale et des programmes transcriptionnels qui déterminent le devenir cellulaire. Une activité altérée de DDIT3 a été impliquée dans des phénotypes inflammatoires et métaboliques, et elle est largement utilisée comme lecture mécanistique dans des modèles de neurodégénérescence, de stress des cellules β lié au diabète et d’adaptation au stress du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDIT3/GADD153/CHOP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ddit3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ddit3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ddit3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDIT3/GADD153/CHOP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ddit3 pour l'étude de la signalisation de DDIT3/GADD153/CHOP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ddit3 essentiels à la fonction de DDIT3/GADD153/CHOP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ddit3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDIT3/GADD153/CHOP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DDIT3/GADD153/CHOP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ddit3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDIT3/GADD153/CHOP plasmide HDR (m) et le DDIT3/GADD153/CHOP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ddit3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ddit3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.