DD4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403692-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DD4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DD4 Double Nickase Plasmid (h) e il DD4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AKR1C4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DD4 Antibody (WW3): sc-100526
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DD4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DD4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKR1C4 codifica un’aldo-cheto reduttasi (AKR1C4; DD4) che catalizza la riduzione NADPH-dipendente di aldeidi e chetosteroidi, contribuendo al metabolismo epatico degli ormoni steroidei e degli acidi biliari. DD4 partecipa alla detossificazione di fase I modulando l’interconversione tra metaboliti steroidei attivi e inattivi e processando composti carbonilici reattivi generati durante lo stress ossidativo. Attraverso i suoi ruoli nella riduzione dei carbonili e nell’omeostasi degli steroidi, AKR1C4 influenza reti di segnalazione metabolica collegate alla gestione dei lipidi e alla clearance epatica degli xenobiotici. Alterazioni nell’espressione o nell’attività di AKR1C4 sono state associate a profili di metaboliti steroidei deregolati e a fenotipi metabolici correlati al fegato, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul crosstalk endocrino-metabolico.
DD4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKR1C4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKR1C4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKR1C4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKR1C4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.