Plasmide CRISPR/Cas9 KO DcpS (h): sc-407308

Présentation

DCPS code l’enzyme humaine de décapsidation « scavenger » DcpS, une hydrolase à triade d’histidines (HIT) qui clive les structures de coiffe résiduelles générées lors de la dégradation des ARNm en 3′→5′, en recyclant les métabolites dérivés de la coiffe et en contribuant au maintien de l’homéostasie du renouvellement des ARN. En hydrolysant des dinucléotides de coiffe tels que m7GpppN, DcpS complète les processus cytoplasmiques et nucléaires de contrôle qualité des ARN et favorise un couplage efficace entre la dégradation des ARNm et la récupération des nucléotides. Une activité altérée de DCPS peut perturber la stabilité du transcriptome et la surveillance des ARN, reliant cette voie à des phénotypes associés à des programmes d’expression génique dérégulés. Par conséquent, DCPS est fréquemment étudié dans le contexte du métabolisme des ARN, des réponses transcriptionnelles adaptatives au stress et des mécanismes qui façonnent la cinétique de dégradation des ARNm.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DcpS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCPS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCPS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCPS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DcpS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCPS pour l'étude de la signalisation de DcpS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DCPS essentiels à la fonction de DcpS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCPS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DcpS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DcpS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCPS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DcpS plasmide HDR (h) et le DcpS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCPS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCPS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.