Plásmido Doble Nickase (h) DC-SIGN: sc-401368-NIC

CD209 codifica DC-SIGN (CD209), un receptor de lectina tipo C expresado principalmente en células dendríticas y en ciertas poblaciones de macrófagos, que se une a glicanos ricos en manosa y fucosilados presentes en microbios y en ligandos endógenos. Mediante el reconocimiento de carbohidratos dependiente de calcio y la señalización a través de adaptadores asociados, DC-SIGN modula la captación de antígenos, la endocitosis y vías posteriores como NF-κB y la señalización dependiente de Raf-1, que moldean las respuestas de citocinas y el cebado de células T. Este receptor contribuye al reconocimiento de patógenos y a la regulación inmunitaria en tejidos mucosos y periféricos, influyendo en el tráfico de leucocitos y en la adhesión célula–célula mediante interacciones con miembros de la familia ICAM. Se ha vinculado la actividad y la expresión alteradas de DC-SIGN con variaciones en la susceptibilidad a desafíos infecciosos y con fenotipos inmunitarios inflamatorios, lo que convierte a CD209 en una diana relevante para estudios mecanísticos de inmunología.

DC-SIGN El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD209 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD209. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD209. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD209 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.