Plasmide CRISPR/Cas9 KO DAX-1 (m): sc-419053

Présentation

Nr0b1 code DAX-1 (NR0B1), un récepteur nucléaire orphelin atypique qui agit principalement comme corégulateur transcriptionnel dans les tissus stéroïdogènes et reproducteurs. DAX-1 module les réseaux de signalisation des récepteurs nucléaires en réprimant ou en ajustant finement les programmes transcriptionnels contrôlés par des facteurs tels que SF-1/NR5A1, influençant ainsi la biosynthèse des hormones stéroïdiennes, le développement surrénalien et la régulation de l’axe hypothalamo–hypophyso–gonadique. Dans des modèles murins, une activité altérée de DAX-1 affecte la différenciation gonadique, la gamétogenèse et l’homéostasie endocrinienne, faisant de Nr0b1 un nœud pertinent pour étudier la régulation génique du développement et le contrôle des voies stéroïdogènes. Une dérégulation des orthologues de NR0B1 a été associée à des phénotypes congénitaux surrénaliens et reproducteurs, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques du développement endocrinien et des voies de détermination du sexe.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DAX-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nr0b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nr0b1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nr0b1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DAX-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nr0b1 pour l'étude de la signalisation de DAX-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nr0b1 essentiels à la fonction de DAX-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nr0b1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DAX-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DAX-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nr0b1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DAX-1 plasmide HDR (m) et le DAX-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nr0b1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nr0b1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.