DAP12 Double Nickase Plasmid (m): sc-423568-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DAP12 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DAP12 Double-Nickase-Plasmid (m) und DAP12 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tyrobp abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DAP12: sc-166084
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DAP12 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423568-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP12 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423568-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Tyrobp kodiert DAP12 (TYROBP), einen transmembranären Adapter mit einem immunrezeptor-tyrosinbasierten Aktivierungsmotiv (ITAM), der in myeloischen Zellen mehrere aktivierende Rezeptoren an die intrazelluläre Signalübertragung koppelt. In murinen Mikroglia, Makrophagen, dendritischen Zellen und Zellen der Osteoklastenlinie assoziiert DAP12 mit Rezeptoren wie TREM2, SIRPβ1 und weiteren Ig-ähnlichen Rezeptoren und fördert SYK-abhängige Signalwege, die Phagozytose, Zytokinproduktion, Chemotaxis, Überleben und die Umgestaltung des Zytoskeletts regulieren. Diese Signalachse überschneidet sich mit angeborenen Immunwegen, darunter FcR-vermittelte Antworten sowie PI3K–AKT- und MAPK-Signalisierung, und prägt so Entzündungsniveau und Gewebeüberwachung. Eine veränderte Aktivität des TYROBP/DAP12-Netzwerks wird in Kontexten wie Neuroinflammation und Mikroglia-Zustandsübergängen, Wirtsabwehr und Störungen des Knochenumbaus umfassend untersucht.
DAP12 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tyrobp-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tyrobp abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tyrobp-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tyrobp-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.