Plasmide CRISPR/Cas9 KO DAP-5 (m): sc-420151

Présentation

Le gène murin Eif4g2 code DAP-5 (également connu sous le nom d’eIF4G2), une protéine d’échafaudage non canonique de l’initiation de la traduction qui favorise la traduction des ARNm indépendante de la coiffe, en particulier dans des conditions de stress où la traduction dépendante de la coiffe est atténuée. DAP-5 interagit avec des composants de la machinerie d’initiation et contribue à la traduction médiée par des IRES de certains transcrits, modulant ainsi la production protéique lors de l’apoptose, du stress du RE et de la privation de nutriments. Par son rôle dans le contrôle traductionnel, DAP-5 influence les décisions de survie cellulaire, la progression du cycle cellulaire et les programmes de différenciation. Une dérégulation des réseaux de traduction liés à EIF4G2/DAP-5 a été associée à des contextes pertinents pour la transformation oncogénique, la neurobiologie et les phénotypes d’adaptation au stress, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DAP-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif4g2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif4g2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif4g2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DAP-5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif4g2 pour l'étude de la signalisation de DAP-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eif4g2 essentiels à la fonction de DAP-5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif4g2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DAP-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DAP-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif4g2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DAP-5 plasmide HDR (m) et le DAP-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif4g2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif4g2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.