Plasmide CRISPR/Cas9 KO DABP (h): sc-405222
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- DABP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique DABP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DABP Antibody (H-6): sc-390146
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO DABP (h) | sc-405222 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène humain **DBP** code la **protéine de liaison à la vitamine D** (DABP, également appelée *group-specific component*), une glycoprotéine plasmatique très abondante qui transporte les métabolites de la vitamine D et contribue à la régulation de leur biodisponibilité. Au-delà de sa fonction de transporteur, la DABP participe à l’élimination de l’actine lors des lésions tissulaires et interagit avec les processus de l’immunité innée via des activités liées à l’activation des macrophages. Les variations de **DBP** ont été étudiées dans des contextes de perturbation de l’homéostasie de la vitamine D et de phénotypes inflammatoires, ce qui étaye son utilisation dans l’étude des interactions entre systèmes endocrinien et immunitaire. L’expression de **DBP** et la liaison de ligands médiée par la DABP sont donc pertinentes pour les voies régissant le métabolisme de la vitamine D, les réponses de barrière et aux dommages tissulaires, ainsi que la signalisation inflammatoire systémique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DABP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DBP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DBP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DABP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DBP pour l'étude de la signalisation de DABP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DBP essentiels à la fonction de DABP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DBP pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le DABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DABP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DBP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le DABP plasmide HDR (h) et le DABP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DBP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DBP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.