Plásmido Doble Nickase (h) Dab1: sc-402167-NIC

DAB1 codifica Disabled-1 (Dab1), una proteína adaptadora intracelular que transmite señales de la vía de Reelin para coordinar la migración neuronal, la laminación cortical y el crecimiento de neuritas durante el desarrollo del cerebro humano. Tras la activación del receptor, Dab1 sufre fosforilación en tirosina y actúa como andamiaje para efectores aguas abajo implicados en procesos de cinasas de la familia Src, PI3K–AKT y remodelación del citoesqueleto, que regulan el posicionamiento y la polaridad celulares. La actividad de DAB1 se intersecta con el tráfico endocítico y la dinámica de microtúbulos/actina, conectando señales extracelulares con cambios en la adhesión y la motilidad. La desregulación de la señalización Reelin–DAB1 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que convierte a DAB1 en una diana útil para estudios mecanísticos de la formación de circuitos neuronales.

Dab1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DAB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DAB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DAB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DAB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.