Plásmido Doble Nickase (h) DAAO: sc-402772-NIC

El gen DAO humano codifica la D-aminoácido oxidasa (DAAO), una flavoproteína peroxisomal que cataliza la desaminación oxidativa de aminoácidos D neutros para convertirlos en los correspondientes ácidos ceto, a la vez que genera peróxido de hidrógeno. Esta actividad se relaciona con el catabolismo de aminoácidos, la homeostasis redox y el metabolismo de especies reactivas de oxígeno asociadas a los peroxisomas, con especial relevancia para la regulación de la disponibilidad de D-serina y su papel como coagonista del receptor NMDA en el sistema nervioso central. Las alteraciones en la función de DAO/DAAO se han estudiado en el contexto de la biología de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas, donde los cambios en el recambio de D-serina y en las vías de estrés oxidativo pueden influir en la señalización sináptica. DAO también se utiliza como un nodo metabólico para estudiar el tráfico de enzimas peroxisomales, la química de oxidación dependiente de flavina y las respuestas celulares al peróxido.

DAAO El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DAO en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DAO. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DAO. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DAO alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.