Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 6B: sc-401651-ACT

KRT6B codifica la citoqueratina 6B, una proteína de filamento intermedio de tipo II que forma heterodímeros con queratinas de tipo I para constituir el citoesqueleto de queratina en epitelios estratificados. La citoqueratina 6B contribuye a la resistencia mecánica, la organización del citoesqueleto y los procesos de remodelación epitelial asociados a la reparación de heridas y a las respuestas al estrés, integrándose con complejos de unión y programas de señalización que coordinan la diferenciación y la proliferación. Se observa una expresión alterada de KRT6B en estados de queratinización hiperproliferativa y en patologías epiteliales, y se utiliza con frecuencia como marcador de queratinocitos activados en piel y tejidos mucosos. Estas características hacen que KRT6B sea relevante para estudiar la homeostasis epitelial, la función de barrera y los cambios del citoesqueleto asociados a la enfermedad en modelos pertinentes.

Cytokeratin 6B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT6B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 6B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT6B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT6B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 6B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT6B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 6B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 6B en células tumorales con expresión de KRT6B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.