Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 16: sc-403138-NIC

KRT16 codifica la citoqueratina 16, una proteína de filamentos intermedios de tipo I que forma heterodímeros con queratinas de tipo II para construir el citoesqueleto de queratina en epitelios estratificados. La citoqueratina 16 se induce rápidamente durante estados de activación epidérmica, contribuyendo a la resiliencia mecánica, la remodelación del citoesqueleto y cambios coordinados en la proliferación y migración de los queratinocitos durante el estrés de la barrera y en programas asociados a la cicatrización. Interactúa con procesos de adhesión y respuesta al estrés, incluida la organización citoesqueleto–desmosoma y la dinámica de la red de queratinas que determina la integridad epitelial. La expresión desregulada de KRT16 o el ensamblaje anómalo de sus filamentos se asocia con fenotipos cutáneos hiperproliferativos y trastornos de la queratinización, lo que la convierte en un objetivo útil para estudiar la señalización de estrés epitelial y la remodelación del citoesqueleto vinculada a la diferenciación.

Cytokeratin 16 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT16 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT16. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT16. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT16 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.