Cytokeratin 16 Plasmide Double Nickase (h): sc-403138-NIC

KRT16 codifica la citocheratina 16, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che forma eterodimeri con cheratine di tipo II per costruire il citoscheletro delle cheratine negli epiteli stratificati. La citocheratina 16 viene indotta rapidamente durante gli stati di attivazione dell’epidermide, sostenendo la resilienza meccanica, il rimodellamento del citoscheletro e cambiamenti coordinati nella proliferazione e nella migrazione dei cheratinociti durante lo stress della barriera e nei programmi associati alla ferita. Interagisce con processi di adesione e di risposta allo stress, inclusi l’organizzazione citoscheletro–desmosoma e la dinamica della rete di cheratine che plasmano l’integrità epiteliale. Un’espressione deregolata di KRT16 o l’assemblaggio anomalo dei filamenti sono associati a fenotipi cutanei iperproliferativi e a disturbi della cheratinizzazione, rendendolo un bersaglio utile per lo studio della segnalazione dello stress epiteliale e del rimodellamento del citoscheletro associato alla differenziazione.

Cytokeratin 16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT16 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT16. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT16. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT16 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.