Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 14: sc-400362-NIC

KRT14 codifica la citoqueratina 14, una proteína de filamento intermedio de tipo I que forma heterodímeros con la queratina 5 para constituir la red de queratinas basales en los epitelios estratificados. Este sistema de filamentos aporta resistencia mecánica, organiza los complejos de adhesión de desmosomas y hemidesmosomas e influye en la polaridad, la migración y las respuestas al estrés de los queratinocitos durante la homeostasis epidérmica y la reparación de heridas. KRT14 es un marcador canónico de los queratinocitos basales y se utiliza con frecuencia para estudiar programas de diferenciación epitelial y la remodelación del citoesqueleto. La expresión alterada de KRT14 o variantes patogénicas se asocian con trastornos de fragilidad epidérmica y se emplean como lecturas moleculares en modelos de disfunción de la barrera cutánea y de la patobiología del epitelio escamoso.

Cytokeratin 14 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT14 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT14 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.