Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 13: sc-401320-ACT

KRT13 codifica la citoqueratina 13, una proteína de filamentos intermedios de tipo I que forma heteropolímeros con queratinas de tipo II para mantener la integridad estructural del epitelio y su resiliencia mecánica. Se encuentra enriquecida en epitelios estratificados no queratinizantes y contribuye a la organización del citoesqueleto, la cohesión célula–célula y los programas de diferenciación epitelial que determinan la función de barrera del tejido. Los patrones alterados de expresión de KRT13 se asocian con el remodelado epitelial y la diferenciación desregulada observados en patologías escamosas, lo que la convierte en un marcador útil para investigar transiciones de estado epitelial. Como parte de la red de filamentos intermedios de queratinas, la citoqueratina 13 se conecta con vías que regulan la dinámica del citoesqueleto y las respuestas al estrés, las cuales influyen en la morfología celular y la arquitectura tisular.

Cytokeratin 13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 13 en células tumorales con expresión de KRT13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.