cytoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402949

Übersicht

CYGB kodiert Cytoglobin, ein hexakoordiniertes Globin, das in zahlreichen Geweben exprimiert wird, Sauerstoff und Stickstoffmonoxid bindet und zur zellulären Redoxhomöostase beiträgt. Cytoglobin wird mit dem Schutz vor oxidativem und nitrosativem Stress in Verbindung gebracht und beeinflusst hypoxieabhängige Signalwege, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies sowie den Stickstoffmonoxid‑Stoffwechsel. Über diese Prozesse wurde CYGB mit der Regulation der Fibroblastenaktivierung, der Gefäßfunktion und der zellulären Anpassung an sauerstoffarme Mikroumgebungen verknüpft. Eine veränderte CYGB-Expression wurde in Zusammenhängen berichtet, die für Tumorbiologie, inflammatorischen Stress und Organfibrose relevant sind, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in Signalweg- und Phänotypstudien unterstützt.

Das cytoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYGB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYGB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYGB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cytoglobin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYGB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cytoglobin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYGB-Exone abzielen, die für die cytoglobin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYGB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cytoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom cytoglobin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYGB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cytoglobin HDR-Plasmid (h) und cytoglobin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYGB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYGB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.