Plasmide CRISPR d'Activation (h) cytoglobin: sc-402949-ACT

Le gène humain **CYGB** code la cytoglobine, une protéine de la famille des globines qui se lie à l’hème et contribue à la gestion cellulaire de l’oxygène ainsi qu’à l’homéostasie redox. **CYGB** est impliqué dans la régulation du métabolisme de l’oxyde nitrique, la limitation des espèces réactives de l’oxygène et le soutien de programmes de survie en conditions d’hypoxie et de stress oxydatif, via des voies qui recoupent la signalisation **HIF** et des réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Son expression a été rapportée dans de nombreux tissus et types cellulaires, avec des rôles dépendants du contexte dans l’activation des fibroblastes, la biologie vasculaire et l’adaptation cellulaire au stress métabolique. Une activité ou une expression dérégulée de **CYGB** a été associée à des phénotypes liés à l’inflammation et à la fibrose, et a été étudiée en oncologie, où l’équilibre oxygène/redox influence la prolifération, l’invasion et les mécanismes de réponse aux traitements.

cytoglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYGB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cytoglobin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYGB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYGB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cytoglobin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYGB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cytoglobin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cytoglobin dans les cellules tumorales présentant une expression de CYGB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.