Plasmide CRISPR d'Activation (h) CysLT₁ Receptor: sc-416516-ACT

CYSLTR1 code le récepteur humain des leucotriènes cystéinylés 1 (récepteur CysLT1), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à LTC4, LTD4 et LTE4 afin de transmettre les signaux de médiateurs lipidiques inflammatoires. Lorsqu’il est activé, il se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation de la phospholipase C, la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et, en aval, des programmes transcriptionnels liés à MAPK et à NF-κB qui régulent la chimiotaxie, la perméabilité vasculaire et la contractilité du muscle lisse. L’activité de CYSLTR1 s’articule avec les voies de biosynthèse de l’acide arachidonique et des leucotriènes et module la communication entre leucocytes et stroma au sein des tissus inflammés. Une signalisation dérégulée du récepteur CysLT1 a été associée à l’inflammation et au remodelage des voies aériennes, aux réponses allergiques et à des pathologies immunitaires plus larges, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique en recherche sur l’inflammation.

CysLT1 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYSLTR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CysLT1 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYSLTR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYSLTR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CysLT1 Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYSLTR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CysLT1 Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CysLT1 Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de CYSLTR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.