Particules Lentivirales d'Activation (m) CYPOR: sc-422345-LAC

Le gène Por murin code la NADPH-cytochrome P450 oxydoréductase (CYPOR), donneur d’électrons indispensable aux cytochromes P450 microsomaux, qui catalysent le métabolisme oxydatif des xénobiotiques, des stéroïdes, des acides gras et des rétinoïdes. CYPOR transfère le pouvoir réducteur du NADPH vers les CYP, reliant l’équilibre redox cellulaire aux voies de détoxification associées au réticulum endoplasmique et à l’homéostasie lipidique. En contrôlant les réactions de bioactivation et d’élimination dépendantes des CYP, Por influence les réponses au stress oxydatif et la capacité métabolique spécifique des tissus dans le foie et les organes extra-hépatiques. Une activité CYPOR dérégulée est donc pertinente pour l’étude des interactions médicamenteuses, des perturbations de la signalisation endocrinienne et lipidique, ainsi que des phénotypes métaboliques associés à une fonction CYP altérée.

Les particules d'activation lentivirales CYPOR (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Por dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYPOR (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Por, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYPOR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Por ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.