CYP7B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405345-ACT

O gene humano **CYP7B1** codifica o citocromo P450 7B1, uma monooxigenase microsomal que catalisa a 7α-hidroxilação de oxisteróis e intermediários esteroides, dando suporte à síntese de ácidos biliares e ao metabolismo de hormonas esteroides. Ao modular os níveis de oxisteróis com atividade de sinalização, o **CYP7B1** influencia a homeostase lipídica e programas de transcrição ligados a recetores nucleares em tecidos hepáticos e extra-hepáticos. A desregulação da atividade do **CYP7B1** está associada a erros inatos do metabolismo de esteróis/ácidos biliares e tem sido relacionada com fenótipos neurológicos e hepáticos por via de alterações na depuração de oxisteróis e de desequilíbrios em vias a jusante. Por isso, o **CYP7B1** é amplamente estudado em contextos como a renovação do colesterol, a sinalização de neuroesteroides e as respostas ao stress metabólico.

CYP7B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP7B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP7B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP7B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP7B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP7B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP7B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP7B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP7B1 em células tumorais com expressão de CYP7B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.