CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m): sc-419932-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP7A1 Double-Nickase-Plasmid (m) und CYP7A1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Cyp7a1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP7A1: sc-518007
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419932-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP7A1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419932-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Cyp7a1* kodiert die Cholesterin-7α-Hydroxylase (CYP7A1), ein in der Leber angereichertes Cytochrom-P450-Enzym, das den geschwindigkeitsbestimmenden Schritt im klassischen Weg der Gallensäuresynthese aus Cholesterin katalysiert. Durch die Kontrolle der Umwandlung von Cholesterin in primäre Gallensäuren reguliert CYP7A1 die Größe des Gallensäurepools, die hepatische Cholesterinhomöostase sowie nachgeschaltete Prozesse des Lipid- und Glukosestoffwechsels über gallensäureresponsive Signalnetzwerke. Die *Cyp7a1*-Aktivität überschneidet sich mit nukleären Rezeptorwegen, darunter FXR und LXR, die die Rückkopplungsregulation von Gallensäurebiosynthese und -transport koordinieren. Eine veränderte CYP7A1-Expression oder -Funktion wird in Mausmodellen häufig als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um cholestatische Phänotypen, Dyslipidämie und ernährungsbedingten metabolischen Stress zu untersuchen.
CYP7A1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Cyp7a1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Cyp7a1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Cyp7a1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Cyp7a1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.