Plasmide Double Nickase (m) CYP7A1: sc-419932-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CYP7A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CYP7A1 Double Nickase (m) et le plasmide CYP7A1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cyp7a1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CYP7A1 Antibody (E-10): sc-518007
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CYP7A1 | sc-419932-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CYP7A1 | sc-419932-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Cyp7a1** code la cholestérol 7α-hydroxylase (CYP7A1), une enzyme du cytochrome P450 enrichie dans le foie qui catalyse l’étape limitante de la voie classique de synthèse des acides biliaires à partir du cholestérol. En contrôlant la conversion du cholestérol en acides biliaires primaires, CYP7A1 régule la taille du pool d’acides biliaires, l’homéostasie du cholestérol hépatique, ainsi que le métabolisme lipidique et glucidique en aval via des réseaux de signalisation sensibles aux acides biliaires. L’activité de Cyp7a1 s’articule avec des voies dépendantes de récepteurs nucléaires, notamment FXR et LXR, qui coordonnent la régulation par rétrocontrôle de la biosynthèse et du transport des acides biliaires. Des modifications de l’expression ou de la fonction de CYP7A1 sont largement utilisées comme point d’entrée mécanistique pour étudier des phénotypes cholestatiques, la dyslipidémie et le stress métabolique induit par l’alimentation dans des modèles murins.
CYP7A1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cyp7a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cyp7a1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cyp7a1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cyp7a1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.