CYP4X1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-429886-ACT

Il gene murino **Cyp4x1** codifica **CYP4X1**, una monoossigenasi del citocromo P450 coinvolta nel metabolismo ossidativo degli acidi grassi e di altri substrati derivati dai lipidi. Come parte della famiglia **CYP4**, CYP4X1 è associata a vie che regolano l’omeostasi dei mediatori lipidici, l’equilibrio redox e il rimodellamento dei lipidi di membrana, processi in grado di influenzare la segnalazione infiammatoria e la fisiologia vascolare o neuronale. Alterazioni dell’attività del citocromo P450 sono frequentemente correlate a cambiamenti nelle risposte allo stress ossidativo e nella produzione di lipidi bioattivi, rendendo **Cyp4x1** un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione metabolica. Nei modelli murini, la modulazione della funzione di CYP4X1 può supportare la ricerca su come le vie di ossidazione dei lipidi plasmino la fisiologia specifica dei tessuti e fenotipi rilevanti per la malattia, senza implicare esiti clinici.

CYP4X1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cyp4x1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP4X1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cyp4x1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp4x1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP4X1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cyp4x1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP4X1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP4X1 nelle cellule tumorali con espressione di Cyp4x1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.