Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP4F8: sc-411598-ACT

Le gène humain **CYP4F8** code une monooxygénase du cytochrome P450 qui contribue au métabolisme oxydatif de médiateurs dérivés des acides gras, participant ainsi à la régulation de la signalisation lipidique locale et au traitement des xénobiotiques. En tant que membre de la grande famille **CYP4**, **CYP4F8** est associé à des réactions d’**ω‑hydroxylation** susceptibles d’influencer le renouvellement des eicosanoïdes et le tonus inflammatoire, en interaction avec des voies contrôlant l’homéostasie épithéliale et les réponses cellulaires au stress. Les variations d’activité et d’expression des CYP450 sont fréquemment étudiées dans le cadre des différences interindividuelles de métabolisme et de la susceptibilité à des phénotypes liés à l’inflammation, faisant de **CYP4F8** une cible utile pour des études mécanistiques. Des modèles in vitro reposant sur la modulation de **CYP4F8** peuvent aider à préciser comment le métabolisme des médiateurs lipidiques façonne des réseaux de signalisation pertinents pour la physiologie spécifique des tissus.

CYP4F8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP4F8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP4F8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP4F8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP4F8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP4F8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP4F8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP4F8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP4F8 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP4F8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.