Plasmide Double Nickase (h) CYP3A5: sc-401306-NIC

CYP3A5 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif d’une grande variété de xénobiotiques et de substrats endogènes, contribuant à la biotransformation de phase I dans le réticulum endoplasmique. En tant que composante des réseaux d’enzymes de métabolisation des médicaments hépatiques et extra-hépatiques, CYP3A5 influence des voies impliquées dans l’homéostasie des stéroïdes et des lipides, ainsi que l’élimination de composés chimiques environnementaux. La variabilité interindividuelle de l’expression et de l’activité de CYP3A5 constitue un déterminant majeur du phénotype métabolique et peut modifier l’exposition aux substrats de CYP3A dans des modèles cellulaires et d’organoïdes. La dérégulation du métabolisme dépendant de CYP3A5 a été étudiée dans des contextes tels que la susceptibilité aux toxiques et les modifications de la fonction hépatique associées aux maladies, ainsi que les programmes transcriptionnels liés à l’inflammation.

CYP3A5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP3A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP3A5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP3A5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP3A5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.