CYP3A5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401306-ACT

CYP3A5 kodiert eine Cytochrom‑P450‑Monooxygenase, die zum oxidativen Metabolismus endogener Steroide und Xenobiotika beiträgt und dadurch die zelluläre Exposition gegenüber bioaktiven Verbindungen und Metaboliten mitbestimmt. Als Teil der CYP3A‑Unterfamilie ist CYP3A5 an einem NADPH‑abhängigen Elektronentransfer über die Cytochrom‑P450‑Reduktase beteiligt und beeinflusst über eine metabolitengetriebene Regulation die Lipidhomöostase, die Hormonsignalgebung und zelluläre Stressantworten. Die Expression ist gewebs‑ und genotypabhängig; eine ausgeprägte Aktivität in Leber und Niere trägt zur interindividuellen Variabilität der metabolischen Kapazität bei. Eine fehlregulierte CYP3A5‑Expression oder ‑Funktion wurde mit veränderter Pharmakokinetik sowie einer erhöhten Anfälligkeit für metabolische und renale Pathophysiologie in Zusammenhang gebracht, was seine Nutzung in mechanistischen Studien zu Entgiftungswegen stützt.

CYP3A5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP3A5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP3A5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP3A5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP3A5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP3A5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP3A5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP3A5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP3A5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP3A5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.