Plasmide Double Nickase (h) CYP3A4: sc-416463-NIC

CYP3A4 code une monooxygénase du cytochrome P450 à hème‑thiolate, qui catalyse le métabolisme oxydatif d’un large éventail de xénobiotiques et de substrats endogènes, notamment les stéroïdes, les acides biliaires et les acides gras. Elle agit principalement dans le réticulum endoplasmique et s’intègre aux réseaux hépatiques et intestinaux de métabolisme des médicaments, en coordonnant la biotransformation de phase I avec les voies en aval de détoxification et de transport. L’activité de CYP3A4 est régulée par la signalisation de récepteurs nucléaires, dont PXR et CAR, reliant des programmes transcriptionnels sensibles à l’exposition à la capacité métabolique. La variabilité interindividuelle de l’expression ou de la fonction de CYP3A4 constitue un déterminant majeur des interactions médicamenteuses et des phénotypes métaboliques altérés étudiés dans des contextes de maladie hépatique, d’inflammation et de reprogrammation métabolique associée au cancer.

CYP3A4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP3A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP3A4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP3A4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP3A4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.