CYP2J2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402955-ACT

CYP2J2 kodiert eine menschliche Cytochrom‑P450‑Epoxygenase, die Arachidonsäure zu Epoxyeicosatriensäuren (EETs) metabolisiert – bioaktive Lipidmediatoren, die den Gefäßtonus, Entzündungsprozesse, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie zelluläre Überlebenssignale beeinflussen. Über seine Rolle in der Lipidsignalgebung und im Xenobiotika‑Metabolismus trägt CYP2J2 zur Endothel‑ und Herzphysiologie bei und kann Signalwege modulieren, die mit der Stickstoffmonoxid‑Signalgebung, Netzwerken inflammatorischer Zytokine und der Redox‑Homöostase verknüpft sind. Veränderte CYP2J2‑Expression oder ‑Aktivität wurde im Zusammenhang mit kardiovaskulären und metabolischen Phänotypen untersucht, ebenso wie in der Tumorbiologie, wo EET‑vermittelte Signalgebung Proliferation und Migration beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen CYP2J2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Biologie von Lipidmediatoren und zur P450‑abhängigen Regulation von Zellzustandsübergängen.

CYP2J2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYP2J2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYP2J2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYP2J2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYP2J2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYP2J2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYP2J2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYP2J2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYP2J2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYP2J2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.