Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP2J2: sc-402955-ACT

CYP2J2 code une époxygénase humaine du cytochrome P450 qui métabolise l’acide arachidonique en acides époxyeicosatriénoïques (EET), des médiateurs lipidiques bioactifs qui influencent le tonus vasculaire, l’inflammation, les réponses au stress oxydatif et les voies de signalisation de survie cellulaire. Par son rôle dans la signalisation lipidique et le métabolisme des xénobiotiques, CYP2J2 contribue à la physiologie endothéliale et cardiaque et peut moduler des voies associées à la signalisation de l’oxyde nitrique, aux réseaux de cytokines inflammatoires et à l’homéostasie redox. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CYP2J2 ont été étudiées dans le cadre de phénotypes cardiovasculaires et métaboliques, ainsi que dans la biologie tumorale, où la signalisation médiée par les EET peut affecter la prolifération et la migration. Ces caractéristiques font de CYP2J2 une cible utile pour des études mécanistiques sur la biologie des médiateurs lipidiques et la régulation, dépendante des P450, des transitions d’état cellulaire.

CYP2J2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP2J2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP2J2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP2J2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP2J2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP2J2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP2J2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP2J2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP2J2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP2J2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.