Plasmide Double Nickase (h) CYP2D6: sc-404098-NIC

CYP2D6 code une monooxygénase microsomale du cytochrome P450 qui catalyse la biotransformation oxydative d’un large éventail de substrats endogènes et de xénobiotiques. Principalement exprimée dans les hépatocytes et localisée au réticulum endoplasmique, CYP2D6 participe à un transfert d’électrons dépendant de la NADPH–cytochrome P450 réductase, soutenant le métabolisme de phase I au sein des réseaux de traitement des médicaments et des stéroïdes. Des variations génétiques ou une régulation altérée de CYP2D6 peuvent modifier la capacité métabolique, influençant l’exposition cellulaire à des intermédiaires bioactifs et les réponses au stress oxydatif. Par conséquent, CYP2D6 est largement étudiée en pharmacogénomique, en toxicologie et dans des modèles de métabolisme hépatique afin de comprendre les différences interindividuelles des phénotypes métaboliques.

CYP2D6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP2D6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP2D6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP2D6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP2D6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.