Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP2A7: sc-403449-ACT

Le gène humain CYP2A7 code une monooxygénase du cytochrome P450 qui participe au métabolisme oxydatif de substrats endogènes et de divers xénobiotiques au sein des réseaux microsomaux de métabolisme des médicaments. En tant que membre de la famille CYP2, CYP2A7 est associé au cycle d’oxydo-réduction avec la NADPH–cytochrome P450 réductase et soutient les processus de biotransformation de phase I, qui influencent les voies de conjugaison et d’élimination en aval. Les variations de l’activité du locus CYP2A peuvent moduler la capacité métabolique et le potentiel de bioactivation, ce qui le rend pertinent pour les études de sensibilité chimique, de réponse aux toxiques et des différences interindividuelles de métabolisme. L’expression de CYP2A7 est donc fréquemment examinée dans le foie et d’autres tissus métaboliquement actifs afin de contextualiser la régulation des voies métaboliques en conditions physiologiques et de stress.

CYP2A7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP2A7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP2A7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP2A7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP2A7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP2A7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP2A7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP2A7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP2A7 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP2A7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.