CYP2A6 Double Nickase Plasmid (h): sc-403448-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP2A6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP2A6 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP2A6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP2A6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP2A6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403448-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2A6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403448-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes CYP2A6 kodiert eine mikrosomale Cytochrom‑P450‑Monooxygenase, die den oxidativen Metabolismus vielfältiger Xenobiotika und endogener Substrate katalysiert und damit zur hepatischen Entgiftungskapazität sowie zur interindividuellen Variabilität der Arzneistoff-Clearance beiträgt. CYP2A6 ist ein Hauptkatalysator der Nicotin‑C‑Oxidation zu Cotinin und beteiligt sich zudem über einen NADPH‑Cytochrom‑P450‑Reduktase‑abhängigen Elektronentransfer an der metabolischen Aktivierung/Inaktivierung mehrerer Umweltchemikalien. Seine Aktivität ist in Netzwerke der Xenobiotikaantwort und die metabolische Homöostase der Leber eingebunden, einschließlich Signalwegen zur Regulation des Redoxgleichgewichts und zum Umgang mit elektrophilen Verbindungen. Genetische Polymorphismen und eine veränderte Expression von CYP2A6 wurden mit Unterschieden in Phänotypen der Nikotinabhängigkeit und einer unterschiedlichen Anfälligkeit für toxikantinduzierten Gewebestress in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in der Pharmakogenomik und der toxikologischen Forschung unterstützt.
CYP2A6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP2A6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP2A6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP2A6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP2A6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.