Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP2A6: sc-403448-ACT

CYP2A6 code une monooxygénase hépatique du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de divers xénobiotiques et substrats endogènes, contribuant au métabolisme des médicaments de phase I et à la biotransformation des composés chimiques. Il s’agit d’un catalyseur majeur de la C‑oxydation de la nicotine en cotinine et il participe à des voies d’activation métabolique/de détoxification qui modulent l’exposition cellulaire à des intermédiaires réactifs ainsi qu’au stress oxydatif. La variabilité de l’expression ou de l’activité de CYP2A6 est associée à des différences interindividuelles de clairance des xénobiotiques et de susceptibilité à la toxicité induite par des substances chimiques, façonnant des phénotypes liés au risque dans la recherche en pharmacologie et en toxicologie. CYP2A6 est donc largement utilisé dans des études portant sur la régulation enzymatique, les dommages à l’ADN médiés par le métabolisme et la biologie des systèmes centrée sur le foie.

CYP2A6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP2A6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP2A6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP2A6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP2A6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP2A6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP2A6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP2A6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP2A6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP2A6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.