Plásmido Doble Nickase (h) CYP26A1: sc-402832-NIC

CYP26A1 codifica una monooxigenasa del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo del ácido retinoico todo-trans, moldeando así los gradientes intracelulares de retinoides y controlando la magnitud y la duración de la señalización de los receptores de ácido retinoico (RAR/RXR). Al regular la disponibilidad de ácido retinoico, CYP26A1 influye en programas transcripcionales implicados en el patrón embrionario, la diferenciación epitelial y la homeostasis tisular. La actividad de CYP26A1 se vincula a las vías metabólicas de los retinoides y al diálogo cruzado con redes del desarrollo y sensibles a hormonas que afectan a las decisiones de destino celular. La desregulación de la expresión o la función de CYP26A1 puede alterar la señalización de retinoides y se ha asociado con anomalías del desarrollo y con estados de diferenciación alterados relevantes para el cáncer y otras afecciones sensibles a los retinoides.

CYP26A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP26A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP26A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP26A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP26A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.