Plasmide Double Nickase (m) CYP1A2: sc-419898-NIC

Le gène murin **Cyp1a2** code l’enzyme du cytochrome P450 **CYP1A2**, une monooxygénase microsomale qui oxyde une grande diversité de substrats endogènes et xénobiotiques et contribue au maintien de l’homéostasie chimique. Son expression est régulée par des programmes transcriptionnels activés par des ligands, notamment la voie du récepteur des hydrocarbures aromatiques (**AhR**), reliant les expositions environnementales à une capacité inductible de métabolisation des médicaments. L’activité de CYP1A2 participe à l’équilibre rédox hépatique et peut influencer la formation de métabolites réactifs ainsi que les réponses au stress oxydant lors de la biotransformation. Une modification de la fonction ou de la régulation de **Cyp1a2** est donc pertinente pour les études portant sur la susceptibilité aux toxiques, la variabilité pharmacocinétique et les interactions gène–environnement dans des modèles murins.

CYP1A2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cyp1a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cyp1a2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cyp1a2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cyp1a2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.