Plasmide Double Nickase (h) CYP1A2: sc-401178-NIC

CYP1A2 code une monooxygénase hépatique du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif de composés endogènes et de nombreux xénobiotiques, notamment la caféine et d’autres substrats aromatiques. Dans le cadre du métabolisme des médicaments de phase I, l’activité de CYP1A2 influence les voies de bioactivation et d’élimination en produisant des métabolites plus polaires et des intermédiaires réactifs susceptibles d’affecter le stress oxydant et l’homéostasie rédox cellulaire. Son expression est régulée par des programmes transcriptionnels de détection des xénobiotiques, en particulier la signalisation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR), établissant un lien entre les expositions environnementales et la reprogrammation métabolique. La variabilité interindividuelle de la fonction et de la régulation de CYP1A2 est largement étudiée pour son impact sur les phénotypes pharmacocinétiques, la susceptibilité aux substances chimiques et la biologie hépatique liée au métabolisme.

CYP1A2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP1A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP1A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP1A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP1A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.