Plasmide Double Nickase (h) CYP11A1: sc-401269-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CYP11A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CYP11A1 Double Nickase (h) et le plasmide CYP11A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYP11A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CYP11A1 | sc-401269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CYP11A1 | sc-401269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP11A1 code l’enzyme mitochondriale cytochrome P450 de clivage de la chaîne latérale (P450scc), qui catalyse la conversion du cholestérol en prégnénolone, première étape — et étape limitante — de la biosynthèse des hormones stéroïdiennes. Cette réaction initie la production des glucocorticoïdes, des minéralocorticoïdes et des stéroïdes sexuels, et s’intègre aux voies du transport mitochondrial du cholestérol ainsi qu’aux voies de partenaires rédox impliquant la ferrédoxine et la ferrédoxine réductase. L’activité de CYP11A1 est au cœur des programmes stéroïdogènes dans le cortex surrénalien et les tissus gonadiques, en lien avec l’homéostasie endocrine et les états de différenciation cellulaire. Une expression ou une fonction altérée de CYP11A1 est associée à des troubles congénitaux de la biosynthèse des stéroïdes, à des phénotypes d’insuffisance surrénalienne et à une signalisation stéroïdogène dérégulée, étudiés dans des modèles de maladies reproductives et surrénaliennes.
CYP11A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP11A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP11A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP11A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP11A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.