Plasmide Double Nickase (h) cyclin T2a/b: sc-404586-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cyclin T2a/b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cyclin T2a/b Double Nickase (h) et le plasmide cyclin T2a/b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCNT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin T2a/b Antibody (2128C1a): sc-81243
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cyclin T2a/b | sc-404586-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cyclin T2a/b | sc-404586-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNT2 code la cycline T2 (isoformes T2a et T2b), une cycline régulatrice qui s’associe à CDK9 pour former le complexe du facteur d’élongation transcriptionnelle positif b (P-TEFb). P-TEFb phosphoryle le domaine C‑terminal de l’ARN polymérase II ainsi que des facteurs d’élongation négatifs, favorisant une élongation transcriptionnelle productive et coordonnant des programmes d’expression liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation et aux réponses au stress. Par ses interactions avec des régulateurs transcriptionnels et des réseaux de contrôle de l’élongation, la cycline T2 influence la dynamique de la transcription associée à la chromatine sur divers ensembles de gènes. La dérégulation de la signalisation P-TEFb et du contrôle de l’élongation a été associée à des états transcriptionnels prolifératifs et immunitaires altérés, faisant de CCNT2 une cible utile pour des études mécanistiques de phénotypes dépendants de la transcription.
cyclin T2a/b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.