Plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin C (h): sc-402308

Présentation

CCNC code la cycline C, une cycline conservée qui s’associe principalement à CDK8 et à des kinases apparentées au sein du complexe Mediator afin de moduler la transcription dépendante de l’ARN polymérase II. Via la signalisation de la kinase de Mediator, la cycline C contribue à intégrer des signaux issus des voies MAPK, Wnt/β-caténine et d’autres voies sensibles au stress, afin de coordonner le contrôle du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les réponses transcriptionnelles adaptatives. La cycline C a également été associée à la dynamique mitochondriale et à la signalisation du stress oxydatif, ce qui reflète son rôle à l’interface entre la transcription nucléaire et l’homéostasie cellulaire. Une dérégulation du contrôle transcriptionnel médié par CCNC a été associée à des altérations de la prolifération et des programmes d’expression génique observées dans divers cancers et autres troubles impliquant une signalisation et des réponses au stress aberrantes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCNC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCNC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCNC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cyclin C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCNC pour l'étude de la signalisation de cyclin C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCNC essentiels à la fonction de cyclin C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCNC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cyclin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cyclin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCNC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cyclin C plasmide HDR (h) et le cyclin C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCNC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCNC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.