Plasmide CRISPR d'Activation (h) CXCR-7: sc-403187-ACT

ACKR3 (CXCR-7) code un récepteur atypique des chimiokines qui se lie à CXCL12/SDF-1 et à CXCL11, et agit principalement comme un capteur/épurateur de ligands (« scavenger ») et un modulateur de la signalisation plutôt que comme un récepteur chimiotactique canonique couplé à Gαi. En façonnant les gradients de chimiokines et les interactions (« cross-talk ») entre récepteurs, CXCR-7 influence les programmes de migration, de survie et d’adhésion dépendants de CXCR4 et affecte des voies en aval, notamment MAPK/ERK ainsi que la signalisation associée à la β-arrestine. Dans les tissus humains, ACKR3 contribue à la dynamique du trafic vasculaire et des cellules immunitaires, et fait l’objet d’études fréquentes dans des contextes tels que l’inflammation, l’invasion tumorale, la biologie des métastases et l’angiogenèse. Son expression et son activité sont également étudiées au cours du développement et du remodelage tissulaire, où la disponibilité des chimiokines constitue un facteur limitant pour le positionnement cellulaire.

CXCR-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACKR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CXCR-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACKR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACKR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CXCR-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACKR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CXCR-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CXCR-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACKR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.