Plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (m): sc-430261

Présentation

Le gène murin **Cul4a** code **CUL-4A**, une protéine échafaudage de la famille des cullines qui assemble des complexes ligase E3 ubiquitine **CUL4–DDB1** afin d’orienter l’ubiquitination et la dégradation par le protéasome de régulateurs clés de la dynamique de la chromatine et de la stabilité du génome. **CUL-4A** participe à la reconnaissance des dommages à l’ADN et à la signalisation de réparation, notamment la réparation par excision de nucléotides ainsi que des processus associés à la réplication, et aide à coordonner la progression du cycle cellulaire via une dégradation protéique régulée. En modulant la protéostasie au niveau de la chromatine, **CUL-4A** influence les programmes transcriptionnels et les réponses de checkpoint en situation de stress génotoxique. Une ubiquitination dépendante de **CUL4A** dérégulée a été associée à des phénotypes de prolifération aberrante et d’instabilité génomique, faisant de **Cul4a** une cible utile pour des études mécanistiques des voies oncogéniques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cul4a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cul4a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cul4a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CUL-4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cul4a pour l'étude de la signalisation de CUL-4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cul4a essentiels à la fonction de CUL-4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cul4a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CUL-4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CUL-4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cul4a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CUL-4A plasmide HDR (m) et le CUL-4A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cul4a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cul4a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.