Plasmide Double Nickase (h) CUG-BP1: sc-401383-NIC

CELF1 code pour CUG-BP1, une protéine liant l’ARN qui régule l’épissage alternatif, la stabilité des ARNm et la traduction en reconnaissant des éléments riches en GU dans les transcrits cibles. Elle coordonne la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique dans des processus tels que le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et la différenciation, en interagissant avec les voies de maturation de l’ARN et la dynamique des mRNP cytoplasmiques. Une activité dérégulée de CELF1 a été associée à des programmes d’épissage aberrant et à une protéostasie altérée, avec une pertinence pour des troubles impliquant une toxicité de l’ARN liée à des répétitions et, plus largement, des anomalies de la régulation du transcriptome. Dans les cellules humaines, les réseaux dépendants de CUG-BP1 constituent un point d’entrée exploitable pour analyser comment l’épissage et le devenir des ARN façonnent le phénotype.

CUG-BP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CELF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CELF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CELF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CELF1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.