CTPS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403505-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CTPS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CTPS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CTPS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTPS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CTPS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403505-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CTPS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403505-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes **CTPS1** kodiert die **CTP-Synthase 1**, ein zytosolisches Enzym, das die ATP-abhängige Aminierung von UTP zu CTP katalysiert – ein geschwindigkeitsbestimmender Schritt der **de-novo-Biosynthese von Pyrimidinnukleotiden**. Durch die Kontrolle intrazellulärer CTP-Pools unterstützt CTPS1 die DNA- und RNA-Synthese, die Phospholipidproduktion sowie die metabolische Anpassung während der Zellzyklusprogression und bei proliferativem Stress. Die CTPS1-Aktivität ist mit Nukleotid-Salvage-Wegen und dem folatabhängigen Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel verknüpft und kann sich zu filamentösen **Cytoophidien** zusammenschließen, die mit der Regulation der Enzymaktivität in Verbindung stehen. Eine fehlregulierte Pyrimidinverwertung und eine Abhängigkeit von CTPS1 wurden mit veränderter Proliferationsfähigkeit in immunologischen und krebsbezogenen Kontexten assoziiert, wodurch CTPS1 ein nützliches Ziel für die Untersuchung der Nukleotidhomöostase und der Wachstumskontrolle darstellt.
CTPS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTPS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTPS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTPS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTPS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.