CTP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419996

Descripción general

Slc25a1 codifica el transportador mitocondrial de citrato CTP, un transportador de la membrana interna que exporta citrato/isocitrato al citosol a cambio de malato. Este flujo conecta el ciclo del ácido tricarboxílico con la producción citosólica de acetil‑CoA, lo que sustenta la lipogénesis de novo, la biosíntesis de colesterol y la regulación de la expresión génica dependiente de la acetilación, además de influir en el equilibrio redox a través de vías generadoras de NADPH. Al coordinar la transferencia de carbono entre mitocondria y citosol, CTP contribuye a la adaptación metabólica durante la proliferación y la diferenciación, y puede modular programas inflamatorios y de respuesta al estrés. La desregulación del transporte de citrato se ha asociado con errores congénitos del metabolismo y fenotipos metabólicos más amplios, lo que convierte a Slc25a1 en una diana relevante para estudiar el metabolismo mitocondrial y la homeostasis lipídica en modelos de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CTP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc25a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc25a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc25a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CTP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc25a1 para la investigación de la señalización de CTP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc25a1 críticos para la función de CTP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc25a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CTP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CTP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc25a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CTP (m) y el plásmido HDR CTP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc25a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc25a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.